تست روش تشخیصی الایزا Olaquindox برای اردک خوک مرغ 96 چاه/کیت حساسیت 0.2 Ppb

کیت تست الایزا Olaquindox برای مرغ اردک خوک 96 چاه/کیت حساسیت 0.2 ppb

1. اصل

این کیت تست بر اساس ایمونواسی آنزیمی رقابتی برای تشخیص Olaquindox در نمونه است.آنتی ژن های جفت کننده از قبل روی نوارهای ریز چاه پوشیده شده اند.TheOlaquindox در نمونه و آنتی‌ژن‌های جفت‌کننده که از قبل روی نوارهای ریز چاه پوشانده شده‌اند برای آنتی‌بادی ضد Olaquindox رقابت می‌کنند.پس از افزودن آنزیم مزدوج، بستر TMB برای رنگ‌آمیزی اضافه می‌شود.مقدار چگالی نوری (OD) نمونه با Olaquindox موجود در آن همبستگی منفی دارد.این مقدار با منحنی استاندارد مقایسه می شود و غلظت Olaquindox متعاقباً به دست می آید.

2. مشخصات فنی

حساسیت: 0.2ppb
دمای دستگاه جوجه کشی: 37℃
زمان انکوباتور: 30 دقیقه الی 30 دقیقه تا 15 دقیقه

حد تشخیص:
گوشت خوک، مرغ 0.2ppb
جگر خوک 1ppb
خوراک 20ppb

نرخ واکنش متقاطع:
Olaquindox100%
کاربادوکس<7%

میزان بازیابی:
بافت 25±95%
خوراک 70% ± 20%

3. اجزاء

4. مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است

1) تجهیزات: میکروپلیت خوان (450 نانومتر/630 نانومتر)، هموژنایزر، نوسان ساز، سانتریفیوژ، پیپت های اندازه گیری، دستگاه خشک کن نیتروژن و تعادل (حساسیت متقابل 0.01 گرم)، انکوباتور.
2) میکروپیپتورها: تک کانال 20 تا 200 میکرولیتر و 100 تا 1000 میکرولیتر و چند کانال 30 تا 300 میکرولیتر.
3) معرفها: استونیتریل، N-هگزان، Al2O3

5. نمونه قبل از درمان

دستورالعمل ها
نکات زیر باید قبل از انجام پیش درمان هر نوع نمونه رعایت شود:
1) فقط نوک های یکبار مصرف را می توان برای آزمایش ها استفاده کرد و هنگام استفاده برای جذب معرف های مختلف، نوک ها باید تغییر کنند.
2) قبل از انجام آزمایش، تمیز بودن هر ظروف آزمایشی باید بررسی شود و در صورت لزوم مجدداً تمیز شود تا از آلودگی هایی که در نتایج آزمایش اختلال ایجاد می کند جلوگیری شود.

آماده سازی نمونه
1) محلول انحلال مجدد نمونه: محلول حل مجدد غلیظ 2× را با آب دیونیزه به نسبت 1:1 رقیق کنید.

5.1 بافت (مرغ، گوشت خوک/جگر)
1. 0.05±2 گرم از نمونه هموژنیزه شده را در لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری، 10 میلی لیتر استونیتریل (بدون آب) اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه به خوبی تکان دهید. در دمای اتاق (20 تا 25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
2. مایع رویی 5 میلی لیتر را بردارید، با ضربه با نیتروژن یا هوا در دمای 56 درجه سانتیگراد خشک کنید.
3. باقیمانده های خشک را در 2 میلی لیتر نیوتن هگزان حل کنید، 1 میلی لیتر از محلول حل مجدد رقیق شده را به مدت 30 ثانیه کاملاً مخلوط کنید، در دمای اتاق (20 تا 25 درجه سانتیگراد) به مدت 5 دقیقه در دمای بالاتر از 4000r/min سانتریفیوژ کنید.فاز بالای لایه N-هگزان را بردارید.
4. 50 میکرولیتر برای آنالیز مصرف کنید.
برابر رقت نمونه: 1

5.2 خوراک
1. 0.05 ± 1 نمونه هموژنیزه شده را در لوله سانتریفیوژ وزن کنید، 2gAl2O3، سپس 5 میلی لیتر استونیتریل را اضافه کنید، به مدت 3 دقیقه به شدت تکان دهید، سانتریفیوژ کنید در بالای 4000r/min و در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه.
2. 50 ul supernatant را بردارید، با 950 لیتر محلول حل شونده رقیق شده به طور یکنواخت مخلوط کنید، 50 میکرولیتر مایع لایه بالایی را برای تجزیه و تحلیل بگیرید.
برابر رقت نمونه: 100

6. روش های الایزا

6.1 دستورالعمل
1) تمام معرف ها و نوارهای میکرو چاه را قبل از استفاده به دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) برسانید.
2) بلافاصله پس از استفاده تمام معرف ها را به 2-8 ℃ برگردانید.
3) تکرارپذیری آنالیز ELISA تا حد زیادی به قوام شستشوی صفحه بستگی دارد.عملکرد صحیح شستشوی صفحه، نکته کلیدی در روش های الایزا است.
4) برای انکوباسیون در دمای ثابت، تمام نمونه ها و معرف ها باید از قرار گرفتن در معرض نور اجتناب کنند و هر میکروپلیت باید توسط غشای پوششی مهر و موم شود.

6.2 رویه عملیاتی
1) تمام معرف های مورد نیاز را خارج کرده و حداقل 30 دقیقه در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) نگه دارید.توجه داشته باشید که هر معرف باید قبل از استفاده به خوبی تکان داده و مخلوط شود.
2) نوار و قاب صفحه مورد نظر را بردارید.میکروپلیت های استفاده نشده باید دوباره مهر و موم شوند و در دمای 8-2 درجه سانتیگراد نگهداری شوند.
3) آماده سازی محلول: 40 میلی لیتر از بافر شستشوی غلیظ 20× را با آب دیونیزه در 1:19 (1 قسمت از بافر شستشوی غلیظ 20× + 19 قسمت آب دیونیزه) رقیق کنید یا در صورت نیاز آماده کنید.
4) شماره گذاری: ریز چاه ها را با توجه به نمونه ها و محلول های استاندارد شماره گذاری کنید.هر نمونه و محلول استاندارد باید در دو نسخه انجام شود.موقعیت های آنها را ثبت کنید.
5) 50 میکرولیتر نمونه یا محلول استاندارد را به چاهک‌های جداگانه اضافه کنید و سپس 50 میکرولیتر محلول آنتی‌بادی را به هر چاهک اضافه کنید.به آرامی تکان دهید تا خوب مخلوط شود، میکروپلیت را با یک فیلم پوششی بپوشانید و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.
6) میکروپلیت را 4-5 بار با 250 میکرولیتر در چاه بافر شستشو بشویید.چاه ها را به مدت 15 تا 30 ثانیه در بافر شستشو خیس کنید و با کاغذ جاذب خشک کنید (اگر پس از ضربه زدن حباب های هوا پیدا شد، با نوک پیپت تمیز آن را قطع کنید).
7) 100 میکرولیتر از کنژوگه آنزیم را به هر چاهک اضافه کنید، تکان دهید و به آرامی مخلوط کنید، میکروپلیت را با یک فیلم پوششی بپوشانید و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.مایع را از چاه بیرون بریزید، میکروپلیت را با بافر شستشو بشویید و تا مرحله 6 ادامه دهید.
8) توسعه رنگ: 50 میکرولیتر از محلول زیرلایه A و 50 میکرولیتر محلول B را به هر چاهک اضافه کنید.به آرامی تکان دهید و مخلوط کنید و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در تاریکی برای ایجاد رنگ انکوبه کنید.
9) سنجش: 50 میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید.به آرامی تکان دهید تا مخلوط شوند.برای تعیین مقدار OD، طول موج میکروپلیت خوان را روی 450 نانومتر تنظیم کنید.(توصیه می شود مقدار OD را در طول موج دوگانه 450/630 نانومتر در عرض 5 دقیقه بخوانید).

7. قضاوت نتیجه

دو روش برای قضاوت در مورد نتایج وجود دارد.اولی قضاوت تقریبی است، در حالی که دومی تعیین کمی است.توجه داشته باشید که مقدار OD نمونه با محتوای Olaquindox همبستگی منفی دارد.

7.1 تعیین کیفی
محدوده غلظت (ng/mL) را می توان از مقایسه میانگین مقدار OD نمونه با محلول استاندارد بدست آورد.با فرض اینکه مقدار OD نمونهⅠ 0.3 و مقدار نمونهⅡ 1.0 باشد، در حالی که محلول های استاندارد به صورت زیر هستند: 2.243 برای 0ppb، 1.816 برای 0.2ppb، 1.415 برای 0.6ppb، 0.74 برای 1.8ppb، 0.74 برای 1.8ppb، برای 5.4ppb و 0.155 برای 16.2ppb، بر این اساس محدوده غلظت نمونه Ⅰ5.4 تا 16.2ppb است و نمونه Ⅱ 0.6 تا 1.8ppb است.

7.2 تعیین کمی
مقادیر متوسط ​​مقادیر جذب معادل درصد میانگین مقدار OD (B) نمونه و محلول استاندارد تقسیم بر مقدار OD (B0) اولین محلول استاندارد (0 استاندارد) و متعاقباً در 100٪ ضرب می شود. ، به این معنا که،

B-میانگین (چاهک دوگانه) مقدار OD نمونه یا محلول استاندارد
B0 - مقدار متوسط ​​OD محلول استاندارد 0ng/mL
منحنی استاندارد را با درصد جذب محلول های استاندارد و مقادیر نیم لگاریتمی محلول های استاندارد Olaquindox (ng/mL) به ترتیب به عنوان محور Y و X رسم کنید.غلظت متناظر نمونه را از منحنی استاندارد با وارد کردن درصد جذب آن در منحنی استاندارد بخوانید.مقدار حاصل متعاقباً در برابر رقت مربوطه ضرب می شود، بنابراین در نهایت غلظت Olaquindox در نمونه بدست می آید.
استفاده از نرم افزار آنالیز حرفه ای این کیت برای آنالیز دقیق و سریع تعداد زیادی از نمونه ها راحت تر خواهد بود.(لطفا برای دریافت این نرم افزار با ما تماس بگیرید)

8. اقدامات احتیاطی

1. دمای اتاق زیر 25 ℃ یا دمای معرف ها و بازگرداندن نمونه ها به دمای اتاق (20-25 ℃) منجر به کاهش استاندارد OD می شود.
2. خشک شدن میکروپلیت در فرآیند شستشو با شرایطی از جمله منحنی های استاندارد غیر خطی و تکرارپذیری نامطلوب همراه خواهد بود.
3. هر معرف و مخلوط واکنش را به طور یکنواخت مخلوط کنید و میکروپلیت را به طور کامل بشویید، در غیر این صورت تکرارپذیری نامطلوب وجود خواهد داشت.
4. محلول توقف محلول اسید سولفوریک 2 مولار است، از تماس با پوست خودداری کنید.
5. میکروپلیت استفاده نشده را در یک کیسه آب بندی خودکار قرار دهید تا دوباره آب بندی شود.ماده استاندارد و رنگ بی رنگ حساس به نور است و بنابراین نمی توان آنها را مستقیماً در معرض نور قرار داد
6. از کیت بیش از تاریخ انقضای آن استفاده نکنید.استفاده از معرف های رقیق شده یا تقلبی از کیت ها منجر به تغییر در حساسیت و تشخیص مقادیر OD می شود.معرف ها را از کیت های شماره های مختلف برای استفاده تعویض نکنید
7. محلول رنگی را با هر رنگی که نشان دهنده انحطاط این محلول است دور بریزید.مقدار تشخیص محلول استاندارد 0 کمتر از 0.5 نشان دهنده انحطاط آن است
8. دمای واکنش بهینه 37 ℃ است و دمای خیلی بالا یا خیلی پایین باعث تغییر در حساسیت تشخیص و مقادیر OD می شود.

9. تاریخ نگهداری و انقضا

ذخیره سازی: در دمای 2 تا 8 ℃، یخ زده نگهداری شود.
تاریخ انقضا: 12 ماه;تاریخ تولید روی جعبه درج شده است.
توجه: اگر بسته خلاء میکروپلیت نشتی داشته باشد، استفاده از آن همچنان معتبر است، در نتیجه آزمایش تأثیری نداشته باشید، برای استفاده راحت باشید.

Q1: چه زمانی ارسال می شود؟
A1: ما کالا را در اسرع وقت ظرف 7 روز کاری پس از دریافت پرداخت برای شما ارسال می کنیم.(در صورت وجود عوامل خارجی مانند اپیدمی، ممکن است زایمان به تاخیر بیفتد)

Q2: آیا از OEM/ODM پشتیبانی می کند؟
A2: می توان آن را پشتیبانی کرد، اما مقدار خاص باید بیش از 100000 قطعه باشد، که برای محصولات سفارشی مناسب است.

Q3: کارخانه شما از نظر کنترل کیفیت چگونه است؟
A3: ما گواهینامه ملی ISO9001 و ISO13485 را داریم.فرآیند تولید ما مطابق با روش های استاندارد برای اطمینان از کیفیت مطلوب محصول است.

Q4: چگونه خدمات پس از فروش را ارائه دهیم؟
A4: ما خدمات پس از فروش فنی آنلاین حرفه ای را ارائه می دهیم.ما می توانیم از طریق ویدئو، تلفن و غیره به شما راهنمایی های تک به تک ارائه دهیم.

Q5: روش پرداخت چیست؟
A5: ما پرداخت را توسط T/T دریافت می کنیم.

Q6: چگونه حمل کنیم؟
A6: بهترین روش حمل و نقل را با دریافت قیمت از بسیاری از شرکت های حمل و نقل تعاونی ما انتخاب کنید و همچنین مطابق با نیاز خود ارسال کنید.