کیت الایزا تشخیصی آمانتادین برای مرغ اردک خوک 96 چاه/کیت حساسیت 0.2 Ppb

کیت تست آمانتادین الایزا برای مرغ اردک خوک 96 چاه / حساسیت کیت 0.2 ppb

 

1. اصل

این کیت تست بر اساس آنزیم ایمونواسی رقابتی برای تشخیص آمانتادین است.آنتی ژن جفت کننده از قبل روی نوارهای ریز چاه پوشیده شده است.آمانتادین موجود در نمونه و آنتی ژن های جفت کننده از پیش پوشش داده شده بر روی نوارهای ریز چاهک برای آنتی بادی های ضد آمانتادین رقابت می کنند.پس از افزودن آنزیم مزدوج، بستر TMB برای رنگ‌آمیزی اضافه می‌شود.مقدار چگالی نوری (OD) نمونه با آمانتادین موجود در نمونه همبستگی منفی دارد.این مقدار با منحنی استاندارد مقایسه شده و پس از آن باقیمانده آمانتادین بدست می آید.

 

2. مشخصات فنی

حساسیت: 0.2ppb
دمای دستگاه جوجه کشی: 25 درجه سانتیگراد
زمان دستگاه جوجه کشی: 30 دقیقه تا 15 دقیقه

حد تشخیص:
مرغ، اردک 0.2ppb

نرخ واکنش متقاطع:
آمانتادین 100%

میزان بازیابی:
مرغ، اردک 90±25٪

 

3. اجزاء

 

1	نوارهای میکرو چاه	12 نوار با 8 چاه قابل جابجایی هر کدام
2	6× محلول استاندارد (هر یک میلی لیتر)	0ppb	0.2ppb
		0.8ppb	3.2ppb
		12.8ppb	51.2ppb
3	مزدوج آنزیمی	7 میلی لیتر	کلاه قرمز
4	محلول کار آنتی بادی	7 میلی لیتر	کلاه آبی
5	بستر A	7 میلی لیتر	کلاه سفید
6	بستر B	7 میلی لیتر	کلاه سیاه
7	راه حل را متوقف کنید	7 میلی لیتر	کلاه زرد
8	استخراج کننده	50 میلی لیتر * 2	کلاه شفاف
9	بافر شستشوی غلیظ 20×	15 میلی لیتر	کلاه سفید
10	5× محلول حل مجدد غلیظ	10 میلی لیتر	کلاه سفید

 

4. مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است

 

1) تجهیزات: ELISA Reader (450 نانومتر/630 نانومتر)، هموژنایزر، شیکر، سانتریفیوژ، تعادل: 0.01 گرم حساس به مقدار، دستگاه خشک کن نیتروژن، انکوباتور، پیپت های مدرج، چاپگر

2) میکروپیپت ها: تک کانال 20 میلی لیتر ~ 200 میلی لیتر، 100 میلی لیتر تا 1000 میلی لیتر، چند کانال 30 تا 300 میکرولیتر

3) معرفها: استونیتریل، n-هگزان.

 

5. نمونه قبل از درمان

 

دستورالعمل (قبل از درمان باید به نکات زیر توجه شود)

1) فقط نوک های یکبار مصرف را می توان برای آزمایش ها استفاده کرد و هنگام استفاده برای جذب معرف های مختلف، نوک ها باید تغییر کنند.

2) قبل از انجام آزمایش، هر ظروف آزمایشی باید تمیز باشد و در صورت لزوم مجدداً تمیز شود تا از آلودگی هایی که با نتایج آزمایش تداخل می کند جلوگیری شود.

 

آماده سازی محلول قبل از پیش تیمار نمونه:

1) محلول عصاره نمونه

6 قسمت استونیتریل + 1 قسمت استخراج کننده برای به دست آوردن محلول عصاره نمونه آماده استفاده.

2) محلول حل کننده نمونه

از 1 قسمت از محلول حل مجدد غلیظ (5X) استفاده کنید و با 4 قسمت آب دیونیزه حل کنید تا محلول حل مجدد نمونه آماده استفاده به دست آید.

آماده سازی نمونه ها

 

5.1 آماده سازی مرغ، نمونه اردک

1) نمونه بافت هموژن 3.0±0.05 گرم را در لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری بردارید.6 میلی لیتر محلول عصاره نمونه را اضافه کنید، به مدت 3 دقیقه تکان دهید، با سرعت بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20 تا 25 درجه سانتیگراد) به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید.

2) 2 میلی لیتر فاز ارگانیک شفاف را در یک ظرف خشک بریزید و با نیتروژن یا هوا در دمای 50~60 ℃ خشک کنید.

3) ابتدا 1 میلی لیتر N-هگزان اضافه کنید، سپس 0.5 میلی لیتر محلول حل مجدد نمونه اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه مخلوط کنید، سانتریفیوژ کنید با سرعت بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20 - 25 درجه سانتیگراد) به مدت 5 دقیقه، لایه بالا n-هگزان را دور بریزید.

4) مایع لایه پایین 50 میکرولیتر را برای آزمایش بردارید

ضریب رقت: 0.5

 

6. روش های الایزا

 

6.1 دستورالعمل

1. معرف های الایزا را قبل از استفاده به دمای اتاق (20 تا 25 درجه سانتیگراد) برسانید.

2. معرف های ELISA را بلافاصله پس از استفاده به 2-8 ℃ برگردانید

3. تکرارپذیری ELISA در فرآیند تجزیه و تحلیل تا حد زیادی به قوام صفحه شستشو بستگی دارد، عملکرد صحیح صفحه شستشو نقطه تعیین برنامه الایزا است.

4. در تمام مراحل جوجه کشی با دمای ثابت، از قرار گرفتن در معرض نور اجتناب کنید، میکروپلیت را با غشای پوششی ببندید.

 

6. 2 روش عملیات

1. کیت تست را حداقل به مدت 30 دقیقه به دمای اتاق (20-25 ℃) بیاورید، توجه داشته باشید که هر معرف باید قبل از استفاده به طور یکنواخت تکان داده شود.

2. نوارهای ریز چاهک مورد نیاز را در قاب های صفحه قرار دهید.میکروپلیت استفاده نشده را مجدداً مهر و موم کنید، در دمای 2-8 ℃ نگهداری شود، یخ زده نباشد.

3. آماده سازی محلول: 15 میلی لیتر بافر شستشوی غلیظ 20× را با آب دیونیزه تا 300 میلی لیتر رقیق کنید.

4. شماره گذاری: ریز چاه ها را با توجه به نمونه ها و محلول استاندارد شماره گذاری کنید.هر نمونه و محلول استاندارد باید در دو نسخه انجام شود.موقعیت های خود را ثبت کنند.

5. اضافه کردن استاندارد/نمونه: 50 میکرولیتر از نمونه یا محلول استاندارد را به چاهک های تکراری جداگانه اضافه کنید، سپس آنزیم مزدوج، 50 میکرولیتر در چاه را اضافه کنید.سپس محلول کار آنتی بادی، 50 میکرولیتر در چاه.با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید، میکروپلیت را با غشای پوششی ببندید، در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه در تاریکی انکوبه کنید.

6. میکروپلیت را بشویید: غشای پوشش را با دقت باز کنید، مایع را از ریز چاه بریزید.250 میکرولیتر در چاه بافر شستشوی رقیق شده را اضافه کنید، 4 تا 5 بار، هر بار 30-15 ثانیه به طور کامل بشویید، سپس بیرون بیاورید و با کاغذ جاذب بپوشانید تا خشک شود. (از نیزه استفاده نشده برای سوراخ کردن حباب پس از خشک شدن استفاده کنید)

7. رنگ آمیزی: 50 میکرولیتر از محلول بستر A و سپس 50 میکرولیتر محلول B را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی بشقاب را به آرامی مخلوط کرده و در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در تاریکی قرار دهید تا رنگ شود.

8. تعیین: 50 میکرولیتر از محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید.طول موج میکروپلیت خوان را روی 450 نانومتر تنظیم کنید تا مقدار OD هر چاه را تعیین کنید.(توصیه می شود مقدار OD را در طول موج دوگانه 450/630 نانومتر در عرض 5 دقیقه بخوانید).

 

7. قضاوت نتیجه

دو روش برای قضاوت در مورد نتایج وجود دارد.اولی قضاوت تقریبی است، در حالی که دومی تعیین کمی است.توجه داشته باشید که مقدار OD نمونه با آمانتادین موجود در نمونه همبستگی منفی دارد

7.1 تعیین کیفی
محدوده غلظت (ng/ml) را می توان با مقایسه میانگین مقدار جذب با استانداردها بدست آورد.فرض کنید مقدار جذب نمونه اول 0.3، نمونه دوم 1.0 و استانداردها عبارتند از: 0ppb از 2.243;0.2ppb از 2.054;0.8ppb از 1.715;3.2ppb از 1.074;12.8ppb از 0.451;51.2ppb از 0.155.سپس غلظت نمونه یک در محدوده 12.8ppb ~ 51.2ppb است.نمونه دوم 3.2ppb ~ 12.8ppb است.محدوده غلظت آمانتادین در نمونه ها را می توان با ضرب در رقت متناظر نمونه بدست آورد.
 

7. 2 تجزیه و تحلیل کمی
برای محاسبه غلظت نمونه ها باید یک منحنی استاندارد ایجاد کرد.قبل از ایجاد منحنی استاندارد، مفهوم درصد جذب باید شناخته شود.
محاسبه درصد جذب:

 

درصد مقدار جذب =	ب	× 100%
	B0

 

ب - مقدار متوسط ​​OD نمونه یا محلول استاندارد
B0 - مقدار متوسط ​​OD محلول استاندارد 0ng/mL
بنابراین استاندارد صفر برابر با 100% ساخته شده و مقادیر جذب به صورت درصد ذکر شده است.مقادیر محاسبه شده برای استانداردها در یک سیستم مختصات روی کاغذ گراف نیمه لگاریتمی در برابر غلظت آمانتادین [ng/mL] وارد می شود.غلظت آمانتادین بر حسب ng/ml (ppb) مربوط به جذب هر نمونه را می توان از منحنی کالیبراسیون خواند.
یک نرم افزار ویژه برای تجزیه و تحلیل نتایج ELISA تعیین دو یا چندگانه را تسهیل می کند.در صورت نیاز لطفا برای درخواست تماس بگیرید.

 

8. اقدامات احتیاطی

 

1. مقدار استاندارد OD پایین خواهد بود اگر دمای اتاق کمتر از 25 درجه سانتیگراد یا دمای معرف باشد و نمونه به دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) برنگشته باشد.
2. میکروپلیت در طول فرآیند شستشو خشک می شود که با غیر خطی بودن منحنی استاندارد و تکرارپذیری ضعیف همراه خواهد بود.بنابراین بلافاصله پس از شستشو به مرحله بعدی بروید.
3. قبل از افزودن هر معرف به خوبی مخلوط کنید.
4. محلول توقف محلول اسید سولفوریک 2M است، از تماس با پوست خودداری کنید.
5. از کیت بیشتر از تاریخ انقضا استفاده نکنید.استفاده از معرف های رقیق شده یا تقلبی از کیت می تواند منجر به تغییر در حساسیت و تشخیص مقادیر OD شود.معرف ها را در دسته های مختلف کیت ها جایگزین نکنید.
6. نگهداری: در دمای 2-8 درجه سانتیگراد نگهداری شود، از یخ زدن خودداری شود.میکروپلیت های استفاده نشده را در کیسه های خود آب بندی مجدد ببندید.مواد استاندارد و کوپلرهای بی رنگ به نور حساس هستند و نمی توان آنها را مستقیماً در معرض نور قرار داد.
7. هر محلول رنگی که رنگ آن نشان دهنده تحلیل رفتن محلول باشد را دور بریزید.مقدار تشخیص (450/630nm) 0 محلول استاندارد (0 ppb) کمتر از 0.5 است ((A450nm<0.5)) که نشان دهنده دناتوره شدن آن است.
8. دمای واکنش بهینه 25 درجه سانتیگراد است.اگر دما خیلی زیاد یا خیلی پایین باشد، حساسیت تشخیص و مقدار OD تغییر می کند.

 

9. تاریخ نگهداری و انقضا

ذخیره سازی: در دمای 2 تا 8 ℃، یخ زده نگهداری شود.
تاریخ انقضا: 12 ماه;تاریخ تولید روی جعبه درج شده است
توجه: اگر بسته خلاء میکروپلیت نشتی داشته باشد، استفاده از آن همچنان معتبر است، در نتیجه آزمایش تأثیری نداشته باشید، برای استفاده راحت باشید.

 

 

 

 

 

Q1: چه زمانی ارسال می شود؟
A1: ما کالا را در اسرع وقت ظرف 7 روز کاری پس از دریافت پرداخت برای شما ارسال می کنیم.(در صورت وجود عوامل خارجی مانند اپیدمی، ممکن است زایمان به تاخیر بیفتد)

 

Q2: آیا از OEM/ODM پشتیبانی می کند؟
A2: می توان آن را پشتیبانی کرد، اما مقدار خاص باید بیش از 100000 قطعه باشد، که برای محصولات سفارشی مناسب است.

 

Q3: کارخانه شما از نظر کنترل کیفیت چگونه است؟
A3: ما گواهینامه ملی ISO9001 و ISO13485 را داریم.فرآیند تولید ما مطابق با روش های استاندارد برای اطمینان از کیفیت مطلوب محصول است.

 

Q4: چگونه خدمات پس از فروش ارائه کنیم؟
A4: ما خدمات پس از فروش فنی آنلاین حرفه ای را ارائه می دهیم.ما می توانیم از طریق ویدئو، تلفن و غیره به شما راهنمایی های تک به تک ارائه دهیم.

 

Q5: روش پرداخت چیست؟
A5: ما پرداخت را توسط T/T دریافت می کنیم.

 

Q6: چگونه حمل کنیم؟
A6: بهترین روش حمل و نقل را با دریافت قیمت از بسیاری از شرکت های حمل و نقل تعاونی ما انتخاب کنید و همچنین با توجه به نیاز خود ارسال کنید.