کیت تست سریع ایمنی مواد غذایی Nitrofuran AMOZ ELISA برای حساسیت شیر ​​0.03ppb 96Wells/Kit

کیت تست ایمنی مواد غذایی Nitrofuran AMOZ ELISA برای حساسیت شیر ​​0.03ppb 96Wells/Kit

 

1.کیت تست ایمنی مواد غذایی Nitrofuran AMOZ ELISAاصل

 

این کیت تشخیص مبتنی بر یک آنزیم ایمونواسی رقابتی برای تشخیص AMOZ در نمونه ها است.آنتی ژن های کونژوگه از قبل روی نوارهای میکرو چاه پوشانده می شوند.AMOZ در نمونه با آنتی ژن کونژوگه که از قبل روی نوار ریز چاه پوشانده شده برای آنتی بادی ضد AMOZ رقابت می کند.پس از افزودن آنزیم مزدوج، بستر TMB برای رنگ‌آمیزی اضافه می‌شود.مقدار چگالی نوری (OD) یک نمونه با AMOZ موجود در آن همبستگی منفی دارد.این مقدار با یک منحنی استاندارد مقایسه می شود و غلظت AMOZ متعاقباً به دست می آید.

 

2. مشخصات فنی

 

حساسیت: 0.03ppb

دمای جوجه کشی: 25 ℃

زمان جوجه کشی: 30 دقیقه تا 15 دقیقه

حد تشخیص بافت، تخم مرغ، عسل: 0.1ppb

نرخ واکنش متقاطع

AMOZ 100%

AHD < 0.1٪

AOZ < 0.1٪

SEM <0.1٪

نرخ بازیابی

بافت 80 ± 25٪

عسل 25 ± 75 درصد

تخم مرغ 25 ± 95 درصد

 

3.کیت تست ایمنی مواد غذایی Nitrofuran AMOZ ELISAاجزاء

 

1	نوارهای میکرو چاه	12 نوار با 8 نوار قابل جدا شدن چاه هر کدام
2	6× محلول استاندارد (هر یک میلی لیتر)	0ppb	0.03ppb
		0.09ppb	0.27ppb
		0.81ppb	2.43ppb
3	مزدوج آنزیمی	7 میلی لیتر	کلاه قرمز
4	محلول کار آنتی بادی	7 میلی لیتر	کلاه آبی
5	بستر A	7 میلی لیتر	کلاه سفید
6	بستر B	7 میلی لیتر	کلاه سیاه
7	راه حل را متوقف کنید	7 میلی لیتر	کلاه زرد
8	بافر شستشوی غلیظ 20×	40 میلی لیتر	کلاه سفید
9	2× محلول حل مجدد غلیظ	50 میلی لیتر	کلاه شفاف
10	2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3)	2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3)	2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3)

 

4. مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است

 

1) تجهیزات: میکروپلیت خوان، چاپگر، هموژنایزر، خشک کن نیتروژن، گرداب، سانتریفیوژ، لوله اندازه گیری، تعادل (0.01 گرم متقابل)، انکوباتور، حمام آب؛

2) میکروپیپت: تک کانال 20-200 میکرولیتر، 100-1000 میکرولیتر، چند کانال 30-300 میکرولیتر.

3) معرف ها: NaOH، اتیل استات، n-هگزان، HCl (حدود 36.5%)، K2HPO4 3H2O.

 

5. نمونه قبل از درمان

 

دستور دادن

قبل از هر نوع پیش تصفیه نمونه باید به نکات زیر توجه شود:

1) آزمایش فقط می تواند از نوک های یکبار مصرف استفاده کند و هنگام آسپیراسیون معرف های مختلف، نوک ها باید جایگزین شوند.

2) قبل از آزمایش، تجهیزات آزمایشی باید تمیز شده و در صورت لزوم مجدداً تمیز شوند تا از آلودگی با نتایج آزمایش جلوگیری شود.

آماده سازی محلول قبل از پیش تیمار نمونه:

1) 0.1 مولار K2HPO4: 11.4 گرم K2HPO4·3H2O را در آب دیونیزه شده تا 500 میلی لیتر حل کنید.

2) 1 مولار هیدروکلراید: 6/8 میلی لیتر HCl (حدود 5/36 درصد) را در آب دیونیزه شده تا 100 میلی لیتر حل کنید.

3) 1 مولار NaOH: 4 گرم NaOH را در آب دیونیزه شده تا 100 میلی لیتر حل کنید.

4) محلول حل مجدد غلیظ 2× را با آب دیونیزه به نسبت 1:1 (1 میلی لیتر محلول حل مجدد غلیظ + 1 میلی لیتر آب دیونیزه) برای حل مجدد نمونه رقیق کنید.

 

5.1 آماده سازی نمونه ها

الف) بافت، تخم مرغ

1) 0.05 ± 1 گرم از نمونه همگن شده را وزن کنید، 4 میلی لیتر آب مقطر، 0.5 میلی لیتر HCI 1 مولار و 100 میکرولیتر 2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3) به هر لوله اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه به خوبی تکان دهید.

2) در 37 درجه سانتیگراد در طول شب (تقریباً 16 ساعت) یا در دمای 56 درجه سانتیگراد با حمام آب (2 ساعت) انکوبه کنید.

3) 5 میلی لیتر 0.1 مولار K2HPO4، 0.4 میلی لیتر NaOH 1 مولار و 6 میلی لیتر اتیل استات به هر لوله اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه تکان دهید.

4) در دمای بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید (اگر امولسیوناسیون وجود دارد یا لایه اتیل استات برای 3 میلی لیتر کافی نیست، نمونه را در حمام آب 80 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید و به طور مکرر سانتریفیوژ کنید؛ یا سرعت را افزایش دهید. و افزایش زمان سانتریفیوژ).

5) 3 میلی لیتر از لایه اتیل استات را به یک لوله گریز از مرکز جدید منتقل کنید و با نیتروژن یا هوا در دمای 50 درجه سانتیگراد تا خشک شدن تبخیر کنید.

6) باقیمانده های خشک را در 2 میلی لیتر N-هگزان حل کنید، 1 میلی لیتر از محلول حل کننده مجدد رقیق شده را اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه به درستی مخلوط کنید، با سرعت بالای 4000 r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.فاز N-هگزان لایه بالا را بردارید (اگر امولسیون وجود دارد، پس از برداشتن فاز N-هگزان لایه بالا، نمونه را در حمام آب 70 درجه سانتیگراد به مدت 10-20 دقیقه انکوبه کنید، به طور مکرر سانتریفیوژ کنید).

7) 50 میکرولیتر از پایین را برای تجزیه و تحلیل بردارید.

تا رقت نمونه: 2

ب) عسل

1) 0.05 ± 2 گرم از نمونه همگن شده (عسل) را وزن کنید، 4 میلی لیتر آب مقطر، 0.5 میلی لیتر HCI 1 مولار و 100 میکرولیتر 2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3) به هر لوله اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه به خوبی تکان دهید.

2) در 37 درجه سانتیگراد در طول شب (تقریباً 16 ساعت) یا در دمای 56 درجه سانتیگراد با حمام آب (2 ساعت) انکوبه کنید.

3) 5 میلی لیتر 0.1 مولار K2HPO4، 0.4 میلی لیتر NaOH 1 مولار و 6 میلی لیتر اتیل استات به هر لوله اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه تکان دهید.

4) در دمای بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید (اگر امولسیون وجود دارد یا لایه اتیل استات برای 3 میلی لیتر کافی نیست، نمونه را در حمام آب 80 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید و به طور مکرر سانتریفیوژ کنید؛ یا سرعت را افزایش دهید. و افزایش زمان سانتریفیوژ).

5) 3 میلی لیتر از لایه اتیل استات را به یک لوله گریز از مرکز جدید منتقل کنید و با نیتروژن یا هوا در دمای 50 درجه سانتیگراد تا خشک شدن تبخیر کنید.

6) باقیمانده های خشک را در 2 میلی لیتر N-هگزان حل کنید، 1 میلی لیتر از محلول حل مجدد رقیق شده را اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه به درستی مخلوط کنید، با سرعت بالای 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.فاز N-هگزان لایه بالا را بردارید (اگر امولسیون وجود دارد، پس از برداشتن فاز N-هگزان لایه بالا، نمونه را در حمام آب 70 درجه سانتیگراد به مدت 10-20 دقیقه انکوبه کنید، به طور مکرر سانتریفیوژ کنید).

7) 50 میکرولیتر از پایین را برای تجزیه و تحلیل بردارید.

برابر رقت نمونه: 1

 

6. روش های الایزا

 

6.1 دستورالعمل

1) قبل از استفاده همه معرف ها و نوارهای ریز چاه را به دمای اتاق (20-25 ℃) برسانید.

2) بلافاصله پس از استفاده تمام معرف ها را به 2-8 ℃ برگردانید.

3) تکرارپذیری آنالیز ELISA تا حد زیادی به قوام شستشوی صفحه بستگی دارد.عملکرد صحیح شستشوی صفحه نکته کلیدی در روش های الایزا است.

4) برای انکوباسیون در دمای ثابت، تمام نمونه ها و معرف ها باید از قرار گرفتن در معرض نور اجتناب کنند و هر میکروپلیت باید توسط غشای پوششی مهر و موم شود.

6.2 رویه های عملیاتی

1) کیت تست را به مدت حداقل 30 دقیقه به دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) برسانید، توجه داشته باشید که هر معرف باید قبل از استفاده تکان داده شود تا به طور یکنواخت مخلوط شود، نوارهای میکرو چاه مورد نیاز را در قاب های صفحه قرار دهید.میکروپلیت استفاده نشده را دوباره مهر و موم کنید، در دمای 2-8 ℃ نگهداری کنید، یخ زده نشوید.

2) آماده سازی محلول: 40 میلی لیتر از بافر شستشوی غلیظ 20× را با آب دیونیزه در 1:19 رقیق کنید (1 قسمت 20 × بافر شستشو غلیظ + 19 قسمت آب یونیزه شده).یا در صورت نیاز آماده کنید.

3) شماره گذاری: ریز چاه ها را با توجه به نمونه ها و محلول استاندارد شماره گذاری کنید.هر نمونه و محلول استاندارد باید در دو نسخه انجام شود، موقعیت آنها را ثبت کنید.

4) 50 میکرولیتر از نمونه یا محلول استاندارد را به چاهک های تکراری جداگانه اضافه کنید.50 میکرولیتر از مزدوج آنزیم و سپس 50 میکرولیتر از محلول عامل آنتی بادی را به هر چاه اضافه کنید، با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید.میکروپلیت را با غشای پوششی ببندید و در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.

5) مایع را از ریز چاه بریزید، روی کاغذ جاذب ببندید تا خشک شود، 250 میکرولیتر در چاه بافر شستشو را برای شستشوی میکروپلیت به مدت 15 تا 30 ثانیه اضافه کنید، سپس خارج کرده و با کاغذ جاذب بپوشانید تا خشک شود، 4 تا 5 بار تکرار کنید.(اگر بعد از زدن حباب ها وجود داشت، آنها را با نوک تمیز برش دهید).

6) رنگ: 50 میکرولیتر از بستر A و سپس 50 میکرولیتر از بستر B را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی بشقاب را به آرامی مخلوط کنید، سپس در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در تاریکی برای رنگ آمیزی انکوبه کنید.

7) تعیین: 50 میکرولیتر از محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید.طول موج میکروپلیت خوان را روی 450 نانومتر تنظیم کنید تا مقدار OD هر چاه را تعیین کنید.(توصیه می شود مقدار OD را در طول موج دوگانه 450/630 نانومتر در عرض 5 دقیقه بخوانید).

 

7. قضاوت نتیجه

 

دو روش برای قضاوت در مورد نتایج وجود دارد: اولی قضاوت تقریبی و دومی تعیین کمی است.توجه داشته باشید که مقدار OD نمونه با غلظت AMOZ همبستگی منفی دارد.

7.1 تعیین کیفی

محدوده غلظت (ng/mL) AMOZ را می توان از مقایسه میانگین مقدار OD نمونه با محلول استاندارد بدست آورد.با فرض اینکه مقدار OD نمونهⅠ 0.3 و مقدار نمونهⅡ 1.0 باشد، مقدار OD محلول های استاندارد است: 2.243 برای 0ppb، 1.816 برای 0.03ppb، 1.415 برای 0.09ppb، 0.74 برای ppb3، 0.07، 0.71 برای ppb 0.07. 0.155 برای 2.43ppb، بر این اساس محدوده غلظت نمونه Ⅰ 0.81 تا 2.43ppb است و نمونه Ⅱ 0.09 تا 0.27ppb است.

7.2 تعیین کمی

مقادیر متوسط ​​مقادیر جذب برای میانگین مقدار OD (B) نمونه و محلول استاندارد تقسیم بر مقدار OD (B0) اولین محلول استاندارد (0 استاندارد) بدست می آید و متعاقباً در 100٪ ضرب می شود. ،

درصد مقدار جذب =	ب	× 100%
	B0

ب - مقدار متوسط ​​OD نمونه یا محلول استاندارد

B0 - مقدار متوسط ​​OD محلول استاندارد 0ng/mL

منحنی استاندارد را با درصدهای جذب محلول استاندارد و مقادیر نیم لگاریتمی محلول استاندارد AMOZ (ng/mL) به ترتیب به عنوان محور Y و X رسم کنید.غلظت متناظر نمونه را از منحنی استاندارد با وارد کردن درصد جذب آن در منحنی استاندارد بخوانید.مقدار حاصل متعاقباً در برابر رقت مربوطه ضرب می شود و در نهایت غلظت AMOZ در نمونه بدست می آید.

 

8. اقدامات احتیاطی

 

1) اگر دمای اتاق کمتر از 25 درجه سانتیگراد باشد یا دمای معرف و نمونه به دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) برنگردد، مقدار استاندارد OD کاهش می یابد.

2) در طول فرآیند شستشو، خشک شدن میکروپلیت با غیر خطی بودن منحنی استاندارد همراه خواهد بود و تکرارپذیری ایده آل نیست.بنابراین بلافاصله پس از شستشو به مرحله بعدی بروید.

3) خوب مخلوط کنید، در غیر این صورت تکرارپذیری ضعیف خواهد بود.

4) محلول استاپ محلول اسید سولفوریک 2 مولار است، از تماس پوستی خودداری کنید.

5) از کیت بیشتر از مدت زمان ماندگاری استفاده نکنید.استفاده از معرف های رقیق شده یا تقلبی از کیت می تواند منجر به تغییر در حساسیت و تشخیص مقادیر OD شود.معرف ها را در دسته های مختلف کیت ها جایگزین نکنید.

6) میکروپلیت های استفاده نشده را در کیسه های زیپلاک مجدد ببندید.محلول های استاندارد و کوپلرهای بی رنگ به نور حساس هستند و نمی توان آنها را مستقیماً در معرض نور قرار داد.

7) هر محلول رنگی که رنگ آن نشان دهنده تحلیل رفتن محلول باشد دور بریزید.مقدار تشخیص کمتر از 0.5 برای محلول استاندارد 1 (0 ppb) نشان دهنده تخریب است.

8) دمای واکنش بهینه 25 درجه سانتیگراد است و حساسیت تشخیص و مقدار OD در صورتی که دما خیلی زیاد یا خیلی کم باشد تغییر می کند.

 

9. تاریخ نگهداری و انقضا

 

ذخیره سازی: در دمای 2 تا 8 ℃، یخ زده نگهداری شود.

تاریخ انقضا: 12 ماه;تاریخ تولید روی جعبه درج شده است

توجه: اگر بسته خلاء میکروپلیت نشتی داشته باشد، استفاده از آن همچنان معتبر است، در نتیجه آزمایش تأثیری نداشته باشید، برای استفاده راحت باشید.

 

 

Q1: چه زمانی ارسال می شود؟
A1: ما کالا را در اسرع وقت ظرف 7 روز کاری پس از دریافت پرداخت برای شما ارسال می کنیم.(در صورت وجود عوامل خارجی مانند اپیدمی، ممکن است زایمان به تاخیر بیفتد)

 

Q2: آیا از OEM/ODM پشتیبانی می کند؟
A2: می توان آن را پشتیبانی کرد، اما مقدار خاص باید بیش از 100000 قطعه باشد، که برای محصولات سفارشی مناسب است.

 

Q3: کارخانه شما از نظر کنترل کیفیت چگونه است؟
A3: ما گواهینامه ملی ISO9001 و ISO13485 را داریم.فرآیند تولید ما مطابق با روش های استاندارد برای اطمینان از کیفیت مطلوب محصول است.

 

Q4: چگونه خدمات پس از فروش را ارائه دهیم؟
A4: ما خدمات پس از فروش فنی آنلاین حرفه ای را ارائه می دهیم.ما می توانیم از طریق ویدئو، تلفن و غیره به شما راهنمایی های تک به تک ارائه دهیم.

 

Q5: روش پرداخت چیست؟
A5: ما پرداخت را توسط T/T دریافت می کنیم.

 

Q6: چگونه حمل کنیم؟
A6: بهترین روش حمل و نقل را با دریافت قیمت از بسیاری از شرکت های حمل و نقل تعاونی ما انتخاب کنید و همچنین مطابق با نیاز خود ارسال کنید.