کیت Nitrofuran AOZ تست ELISA برای حساسیت عسل میگوی ماهی 0.01ppb 96Wells/Kit

کیت تست Nitrofuran AOZ ELISA برای حساسیت عسل میگوی ماهی 0.01ppb 96Wells/Kit

 

1. اصل

این fکیت تست سریع ایمنیبر اساس آنزیم ایمونواسی رقابتی برای تشخیص AOZ در نمونه است.آنتی ژن های جفت کننده از قبل روی نوارهای ریز چاه پوشیده شده اند.AOZ در نمونه و آنتی ژن های جفت شده از پیش پوشش داده شده بر روی نوارهای میکرو چاه برای آنتی بادی های ضد AOZ رقابت می کنند.پس از افزودن آنزیم مزدوج، بستر TMB برای رنگ‌آمیزی اضافه می‌شود.مقدار چگالی نوری (OD) نمونه با AOZ موجود در آن همبستگی منفی دارد.این مقدار با منحنی استاندارد مقایسه می شود و غلظت AOZ متعاقباً به دست می آید.

2. اجزاء

1	نوارهای میکرو چاه	12 نوار با 8 نوار قابل جدا شدن چاه هر کدام
2	محلول استاندارد 6× (هر کدام 1 میلی لیتر)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	مزدوج آنزیمی	7 میلی لیتر	کلاه قرمز
4	محلول کار آنتی بادی	7 میلی لیتر	کلاه آبی
5	بستر A	7 میلی لیتر	کلاه سفید
6	بستر B	7 میلی لیتر	کلاه سیاه
7	راه حل را متوقف کنید	7 میلی لیتر	کلاه زرد
8	بافر شستشوی غلیظ 20×	40 میلی لیتر	کلاه سفید
9	2× محلول حل مجدد غلیظ	50 میلی لیتر	کلاه شفاف
10	2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3)	10 میلی لیتر	کلاه سیاه

 

3. مشخصات فنی

حساسیت: 0.01ppb

دمای جوجه کشی: 25 ℃

زمان جوجه کشی: 30 دقیقه تا 15 دقیقه

حد تشخیص

بافت، تخم مرغ، عسل: 0.05ppb

نرخ واکنش متقاطع

AOZ 100%

AMOZ <0.1%

AHD <0.1%

SEM <0.1%

نرخ بازیابی

بافت، تخم مرغ 25±95 درصد

عسل 23±85 درصد

 

4. مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است

1) تجهیزات: میکروپلیت خوان، چاپگر، هموژنایزر، دستگاه خشک کن نیتروژن، گرداب، سانتریفیوژ، پیپت های اندازه گیری، تعادل (حساسیت متقابل 0.01 گرم)، انکوباتور، حمام آب.

2) میکروپیپتورها: تک کانال 20-200 میکرولیتر، 100-1000 میکرولیتر و چند کاناله 300-300 میکرولیتر.

3) معرف ها: NaOH، اتیل استات، n-هگزان، HCI (تقریباً 36.5٪)، K2HPO4·3H2O

 

5. نمونه قبل از درمان

دستورالعمل ها

نکات زیر باید قبل از انجام پیش درمان هر نوع نمونه رعایت شود:

1) فقط نوک های یکبار مصرف را می توان برای آزمایش ها استفاده کرد و هنگام استفاده برای جذب معرف های مختلف، نوک ها باید تغییر کنند.

2) قبل از انجام آزمایش، هر یک از تجهیزات آزمایشی باید تمیز باشد و در صورت لزوم باید مجدداً تمیز شوند تا از آلودگی هایی که با نتایج آزمایش تداخل می کند جلوگیری شود.

آماده سازی محلول قبل از پیش تیمار نمونه:

1) 0.1 مولار K2HPO4: 11.4 گرم K2HPO4·3H2O را در آب دیونیزه شده تا 500 میلی لیتر حل کنید.

2) 1 مولار هیدروکلراید: 6/8 میلی لیتر HCI (تقریباً 5/36 درصد) را در آب دیونیزه شده تا 100 میلی لیتر حل کنید.

3) 1 مولار NaOH: 4 گرم NaOH را در آب یونیزه شده تا 100 میلی لیتر حل کنید.

4) محلول 2× انحلال مجدد غلیظ با آب دیونیزه به نسبت 1:1 (1 میلی لیتر محلول حل مجدد غلیظ + 1 میلی لیتر آب دیونیزه) رقیق می شود که برای حل مجدد نمونه استفاده می شود.

 

5.1 آماده سازی نمونه ها

آ)بافت، تخم مرغ

1) 0.05 ± 1 گرم از نمونه همگن شده را وزن کنید، 4 میلی لیتر آب مقطر، 0.5 میلی لیتر HCI 1 مولار و 100 میکرولیتر 2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3) به هر لوله اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه به خوبی تکان دهید.

2) در 37 درجه سانتیگراد در طول شب (تقریباً 16 ساعت) یا در دمای 56 درجه سانتیگراد با حمام آب (2 ساعت) انکوبه کنید.

3) 5 میلی لیتر 0.1 مولار K2HPO4، 0.4 میلی لیتر NaOH 1 مولار و 6 میلی لیتر اتیل استات به هر لوله اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه تکان دهید.

4) در دمای بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید (اگر امولسیوناسیون وجود دارد یا لایه اتیل استات برای 3 میلی لیتر کافی نیست، نمونه را در حمام آب 80 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید و به طور مکرر سانتریفیوژ کنید؛ یا سرعت را افزایش دهید. و افزایش زمان سانتریفیوژ).

5) 3 میلی لیتر از لایه اتیل استات را به یک لوله گریز از مرکز جدید منتقل کنید و با نیتروژن یا هوا در دمای 50 درجه سانتیگراد تا خشک شدن تبخیر کنید.

6) باقیمانده های خشک را در 2 میلی لیتر N-هگزان حل کنید، 1 میلی لیتر از محلول حل کننده مجدد رقیق شده را اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه به درستی مخلوط کنید، با سرعت بالای 4000 r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.فاز N-هگزان لایه بالا را بردارید (اگر امولسیون وجود دارد، پس از برداشتن فاز N-هگزان لایه بالا، نمونه را در حمام آب 70 درجه سانتیگراد به مدت 10-20 دقیقه انکوبه کنید، به طور مکرر سانتریفیوژ کنید).

7) 50 میکرولیتر از پایین را برای تجزیه و تحلیل بردارید.

تا رقت نمونه: 2

 

ب) عسل

1) 0.05 ± 2 گرم از نمونه همگن شده (عسل) را وزن کنید، 4 میلی لیتر آب مقطر، 0.5 میلی لیتر HCI 1 مولار و 100 میکرولیتر 2-نیتروبنزلدئید (C7H5NO3) به هر لوله اضافه کنید، به مدت 2 دقیقه به خوبی تکان دهید.

2) در 37 درجه سانتیگراد در طول شب (تقریباً 16 ساعت) یا در دمای 56 درجه سانتیگراد با حمام آب (2 ساعت) انکوبه کنید.

3) 5 میلی لیتر 0.1 مولار K2HPO4، 0.4 میلی لیتر NaOH 1 مولار و 6 میلی لیتر اتیل استات به هر لوله اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه تکان دهید.

4) در دمای بالاتر از 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید (اگر امولسیون وجود دارد یا لایه اتیل استات برای 3 میلی لیتر کافی نیست، نمونه را در حمام آب 80 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید و به طور مکرر سانتریفیوژ کنید؛ یا سرعت را افزایش دهید. و افزایش زمان سانتریفیوژ).

5) 3 میلی لیتر از لایه اتیل استات را به یک لوله گریز از مرکز جدید منتقل کنید و با نیتروژن یا هوا در دمای 50 درجه سانتیگراد تا خشک شدن تبخیر کنید.

6) باقیمانده های خشک را در 2 میلی لیتر N-هگزان حل کنید، 1 میلی لیتر از محلول حل مجدد رقیق شده را اضافه کنید، به مدت 30 ثانیه به درستی مخلوط کنید، با سرعت بالای 4000r/min در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.فاز N-هگزان لایه بالا را بردارید (اگر امولسیون وجود دارد، پس از برداشتن فاز N-هگزان لایه بالا، نمونه را در حمام آب 70 درجه سانتیگراد به مدت 10-20 دقیقه انکوبه کنید، به طور مکرر سانتریفیوژ کنید).

7) 50 میکرولیتر از پایین را برای تجزیه و تحلیل بردارید.

برابر رقت نمونه: 1

 

6. روش های الایزا

6.1 دستورالعمل ها

1) قبل از استفاده همه معرف ها و نوارهای ریز چاه را به دمای اتاق (20-25 ℃) برسانید.

2) بلافاصله پس از استفاده تمام معرف ها را به 2-8 ℃ برگردانید.

3) تکرارپذیری آنالیز ELISA تا حد زیادی به قوام شستشوی صفحه بستگی دارد.عملکرد صحیح شستشوی صفحه نکته کلیدی در روش های الایزا است.

4) برای انکوباسیون در دمای ثابت، تمام نمونه ها و معرف ها باید از قرار گرفتن در معرض نور اجتناب کنند و هر میکروپلیت باید توسط غشای پوششی مهر و موم شود.

 

6.2 رویه های عملیات

1)کیت تست را به مدت حداقل 30 دقیقه به دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) برسانید، توجه داشته باشید که هر معرف باید قبل از استفاده تکان داده شود تا به طور یکنواخت مخلوط شود، نوارهای میکرو چاه مورد نیاز را در قاب های صفحه قرار دهید.میکروپلیت استفاده نشده را دوباره مهر و موم کنید، در دمای 2-8 ℃ نگهداری کنید، یخ زده نشوید.

2)آماده سازی محلول: 40 میلی لیتر از بافر شستشوی غلیظ 20× را با آب دیونیزه در 1:19 رقیق کنید (1 قسمت 20 × بافر شستشو غلیظ + 19 قسمت آب دیونیزه).یا در صورت نیاز آماده کنید..

3)شماره گذاری: ریز چاه ها را بر اساس نمونه ها و محلول استاندارد شماره گذاری کنید.هر نمونه و محلول استاندارد باید در دو نسخه انجام شود، موقعیت آنها را ثبت کنید.

4)50 میکرولیتر از نمونه یا محلول استاندارد را به چاهک های تکراری جداگانه اضافه کنید.50 میکرولیتر کونژوگه آنزیم و سپس 50 میکرولیتر از محلول عامل آنتی بادی را به هر چاه اضافه کنید، با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید.میکروپلیت را با غشای پوششی ببندید و در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.

5)مایع را از ریز چاه بریزید، روی کاغذ جاذب ببندید تا خشک شود، 250 میکرولیتر در چاه بافر شستشو را برای شستشوی میکروپلیت به مدت 15 تا 30 ثانیه اضافه کنید، سپس خارج کرده و با کاغذ جاذب بپوشانید تا خشک شود، 4 تا 5 بار تکرار کنید.(اگر بعد از زدن حباب ها وجود داشت، آنها را با نوک تمیز برش دهید).

6)رنگ: 50 میکرولیتر از بستر A و سپس 50 میکرولیتر از بستر B را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی بشقاب را به آرامی مخلوط کنید، سپس در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه در تاریکی انکوبه کنید تا رنگ شود.

7)تعیین: 50 میکرولیتر از محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن دستی صفحه را به آرامی مخلوط کنید.طول موج میکروپلیت خوان را روی 450 نانومتر تنظیم کنید تا مقدار OD هر چاه را تعیین کنید.(توصیه می شود مقدار OD را در طول موج دوگانه 450/630 نانومتر در عرض 5 دقیقه بخوانید).

 

7. قضاوت نتیجه

دو روش برای قضاوت در مورد نتایج وجود دارد: اولی قضاوت تقریبی و دومی تعیین کمی است.توجه داشته باشید که مقدار OD نمونه با غلظت AOZ همبستگی منفی دارد.

7.1 تعیین کیفی

محدوده غلظت (ng/mL) AOZ را می توان از مقایسه میانگین مقدار OD نمونه با محلول استاندارد بدست آورد.با فرض اینکه مقدار OD نمونهⅠ 0.3، و مقدار نمونهⅡ 1.0 باشد، مقدار OD محلول های استاندارد است: 2.243 برای 0ppb، 1.816 برای 0.01ppb، 1.415 برای 0.03ppb، 0.74 برای ppb3، 0.09 0.71ppb برای 0.09ppb. 0.155 برای 0.81ppb، بر این اساس محدوده غلظت نمونهⅠ 0.27ppb تا 0.81ppb است و نمونه Ⅱ 0.03ppb تا 0.09ppb است.

7.2 تعیین کمی

مقادیر متوسط ​​مقادیر جذب برای میانگین مقدار OD (B) نمونه و محلول استاندارد تقسیم بر مقدار OD (B0) اولین محلول استاندارد (0 استاندارد) بدست می آید و متعاقباً در 100٪ ضرب می شود. ،

 

درصد مقدار جذب =	ب	× 100%
	B0

 

ب - مقدار متوسط ​​OD نمونه یا محلول استاندارد

B0 - مقدار متوسط ​​OD محلول استاندارد 0ng/mL

منحنی استاندارد را با درصدهای جذب محلول استاندارد و مقادیر نیم لگاریتمی محلول استاندارد AOZ (ng/mL) به ترتیب به عنوان محور Y و X رسم کنید.غلظت متناظر نمونه را از منحنی استاندارد با وارد کردن درصد جذب آن در منحنی استاندارد بخوانید.مقدار حاصل متعاقباً در برابر رقت مربوطه ضرب می شود و در نهایت غلظت AOZ در نمونه بدست می آید.

 

8. اقدامات احتیاطی

1)دمای اتاق زیر 25 ℃ یا دمای معرف ها و بازگرداندن نمونه ها به دمای اتاق (20-25 ℃) منجر به کاهش استاندارد OD می شود.

2)خشکی میکروپلیت در فرآیند شستشو با شرایطی از جمله منحنی های استاندارد غیر خطی و تکرارپذیری نامطلوب همراه خواهد بود.بنابراین بلافاصله پس از شستشو به مرحله بعدی ادامه دهید.

3)به طور مساوی مخلوط کنید، در غیر این صورت تکرارپذیری نامطلوب وجود خواهد داشت.

4)محلول توقف محلول اسید سولفوریک 2 مولار است، از تماس با پوست خودداری کنید.

5)از کیت بیش از تاریخ انقضای آن استفاده نکنید.استفاده از معرف های رقیق شده یا تقلبی از کیت ها منجر به تغییر در حساسیت و تشخیص مقادیر OD می شود.معرف ها را از کیت های لات های مختلف برای استفاده تعویض نکنید.

6)میکروپلیت استفاده نشده را در یک کیسه آب بندی خودکار قرار دهید تا دوباره آب بندی شود.محلول استاندارد و رنگ ساز بی رنگ حساس به نور است و بنابراین نمی توان آنها را مستقیماً در معرض نور قرار داد.

7)محلول رنگ آمیزی را با هر رنگی که نشان دهنده انحطاط این محلول است دور بریزید.مقدار تشخیص محلول استاندارد 1 (0 ppb) کمتر از 0.5 نشان دهنده انحطاط آن است.

8)دمای بهینه واکنش 25 ℃ است و دمای خیلی بالا یا خیلی پایین باعث تغییر در حساسیت تشخیص و مقادیر OD می شود.

 

9. تاریخ نگهداری و انقضا

ذخیره سازی: در دمای 2 تا 8 ℃، یخ زده نگهداری شود.

تاریخ انقضا: 12 ماه;تاریخ تولید روی جعبه درج شده است

توجه: اگر بسته خلاء میکروپلیت نشتی داشته باشد، استفاده از آن همچنان معتبر است، در نتیجه آزمایش تأثیری نداشته باشید، برای استفاده راحت باشید.

 

 

Q1: چقدر طول می کشد تا شما ارسال کنید؟
A1: معمولا ظرف 7 روز کاری ارسال می شود.

 

Q2: آیا از OEM/ODM پشتیبانی می کنید؟
A2: قابل پشتیبانی است.ما می توانیم با توجه به نیازهای خاص و مقادیر خاص شما سفارشی کنیم.

 

Q3: کارخانه شما از نظر کنترل کیفیت چگونه است؟
A3: ما دارای گواهینامه ISO9001 و گواهینامه ISO13485 هستیم، تا کنون تمام مراحل تولید، ما قوانین استانداردی داریم، ما از رفتار و قوانین مربوطه دولت پیروی می کنیم.

 

Q4: آیا خدمات پس از فروش تضمین شده است؟
A4: ما خدمات پس از فروش فنی آنلاین حرفه ای را ارائه می دهیم.اگر محصول در طول آزمایش شکست بخورد، می توانیم ارائه دهیم
راهنمایی یک به یک از طریق تلفن، ویدئو و سایر اشکال.

 

Q5: حداقل مقدار سفارش شما چقدر است؟
A5: 1 کیت.

 

Q6: روش حمل و نقل چیست؟
A6: می توان آن را از طریق اکسپرس (FEDEX، UPS، DHL، EMS، و غیره) یا از طریق هوا و زمین ارسال کرد. لطفاً قبل از سفارش با ما تأیید کنید.