کیت های تست مایکوتوکسین زرالنون 0.1ppb برای ذرت خوراکی 96 چاهک/کیت

کیت تست ELISA Zearalenone برای ذرت خوراکی 96 چاهک/ حساسیت کیت 0.1ppb

 

1. اصل

این کیت تست بر اساس آنزیم ایمونواسی رقابتی برای تشخیص زرالنون است.آنتی ژن جفت کننده از قبل روی نوارهای ریز چاه پوشیده شده است.زرالنون در نمونه و آنتی ژن های جفت شده از پیش پوشش داده شده روی نوارهای ریز چاهک برای آنتی بادی های ضد زرالنون رقابت می کنند.پس از افزودن آنزیم مزدوج، بستر TMB برای رنگ‌آمیزی اضافه می‌شود.مقدار چگالی نوری (OD) نمونه با زرالنون در نمونه همبستگی منفی دارد.این مقدار با منحنی استاندارد مقایسه می شود و پس از آن باقیمانده زرالنون بدست می آید.

2. مشخصات فنی

حساسیت: 0.1ppb
دمای دستگاه جوجه کشی: 25 درجه سانتیگراد
زمان دستگاه جوجه کشی: 30 دقیقه تا 15 دقیقه

حد تشخیص:
خوراک 10ppb
برنج، ذرت، بادام زمینی 5ppb

نرخ واکنش متقاطع:
زرالنون 100%

میزان بازیابی:
خوراک، برنج، بادام زمینی، ذرت 100±30 درصد

3. اجزاء

 

 

1	نوارهای میکرو چاه	12 نوار با 8 چاه قابل جابجایی هر کدام
2	6× محلول استاندارد (هر یک میلی لیتر)	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1 ppb
3	مزدوج آنزیمی	7 میلی لیتر	کلاه قرمز
4	محلول کار آنتی بادی	7 میلی لیتر	کلاه آبی
5	بستر A	7 میلی لیتر	کلاه سفید
6	بستر B	7 میلی لیتر	کلاه سیاه
7	راه حل را متوقف کنید	7 میلی لیتر	کلاه زرد
8	بافر شستشو غلیظ 20X	40 میلی لیتر	کلاه سفید
9	2X محلول حل مجدد غلیظ	50 میلی لیتر	کلاه شفاف

 

4. مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است

1) تجهیزات: ELISA Reader (450 نانومتر/630 نانومتر)، هموژنایزر، شیکر، سانتریفیوژ، تعادل: 0.01 گرم حساس به مقدار، دستگاه خشک کن نیتروژن، انکوباتور، پیپت های مدرج، چاپگر
2) میکروپیپت ها: تک کانال 20 ~ 200 لیتر، 100 لیتر ~ 1000 لیتر، چند کانال 30 تا 300 میکرولیتر
3) معرفها: متانول، n-هگزان.

5. نمونه قبل از درمان

دستورالعمل (قبل از درمان باید به نکات زیر توجه شود)
1) فقط نوک های یکبار مصرف را می توان برای آزمایش ها استفاده کرد و هنگام استفاده برای جذب معرف های مختلف، نوک ها باید تغییر کنند.
2) قبل از انجام آزمایش، هر ظروف آزمایشی باید تمیز باشد و در صورت لزوم مجدداً تمیز شود تا از آلودگی هایی که با نتایج آزمایش تداخل می کند جلوگیری شود.

آماده سازی محلول قبل از پیش تیمار نمونه:
راه حل شماره1: حل مجدد نمونه
محلول حل مجدد غلیظ 2 با آب دیونیزه به نسبت 1:1 (1 قسمت محلول حل مجدد غلیظ + 1 قسمت آب دیونیزه) رقیق می شود که برای حل مجدد نمونه استفاده می شود.
راه حل شماره2: محلول عصاره نمونه
7 قسمت متانول + 3 قسمت آب دیونیزه برای به دست آوردن محلول عصاره نمونه آماده استفاده.

آماده سازی نمونه ها
5.1 آماده سازی نمونه خوراک
1) نمونه خوراک آسیاب شده 1.0 ± 0.05 گرم را به لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری ببرید، محلول عصاره نمونه 5 میلی لیتری را اضافه کنید.
2) به مدت 3 دقیقه به طور کامل تکان دهید (یا بیش از 5 دقیقه با دست تکان دهید)، سانتریفیوژ را با سرعت بالای 4000r/min در دمای 20 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انجام دهید.
3) 50 میلی لیتر مایع رویی (لایه بالا) بردارید، 950 لیتر نمونه را در حل مجدد اضافه کنید، تکان دهید تا یکنواخت شود.
4) 50 میکرولیتر برای آزمایش مصرف کنید
ضریب رقت: 100
توجه: اگر غلظت باقیمانده دارو در نمونه خارج از محدوده منحنی باشد، نمونه را می توان بیشتر برای آزمایش رقیق کرد (به عنوان مثال: 50 ul مایع رویی (بالا) را در یک لوله سانتریفیوژ جدید قرار دهید، 1450 لیتر آب دیونیزه شده، ضریب رقت را اضافه کنید. 150 است).

5.2 تهیه ذرت، نمونه برنج
1) نمونه آسیاب شده 1.0±0.05 گرم را در لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری بردارید.5 میلی لیتر محلول عصاره نمونه را اضافه کنید.
2) به مدت 3 دقیقه به طور کامل تکان دهید (یا بیش از 5 دقیقه با دست تکان دهید)، سانتریفیوژ را با سرعت بالای 4000r/min در دمای 20 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انجام دهید.
3) 100 لیتر مایع رویی (لایه بالا) بردارید، 900 لیتر نمونه را در حل مجدد اضافه کنید، تکان دهید تا یکنواخت شود.
4) 50 میکرولیتر برای آزمایش مصرف کنید
ضریب رقیق سازی: 50
توجه: اگر غلظت باقیمانده دارو در نمونه خارج از محدوده منحنی باشد، نمونه را می توان بیشتر برای آزمایش رقیق کرد (به عنوان مثال: 50 ul مایع رویی (لایه بالا) را در یک لوله سانتریفیوژ جدید قرار دهید، 950 آب دیونیزه شده، فاکتور رقت را اضافه کنید. 100 است).

5.3 تهیه نمونه بادام زمینی
1) نمونه بادام زمینی آسیاب شده 1.0 ± 0.05 گرم را در لوله سانتریفیوژ 50 میلی لیتری بردارید.5 میلی لیتر محلول عصاره نمونه را اضافه کنید، سپس 4 میلی لیتر هگزان اضافه کنید.
2) به مدت 3 دقیقه به طور کامل تکان دهید (یا بیش از 5 دقیقه با دست تکان دهید)، با سرعت بالای 4000r/min در دمای 20 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
3) مایع شفاف لایه بالا را دور بریزید، 100 لیتر مایع لایه میانی بردارید، 900 لیتر نمونه را دوباره حل کنید، تکان دهید تا یکنواخت شود.
4) 50 میکرولیتر برای آزمایش مصرف کنید
ضریب رقیق سازی: 50
توجه: اگر غلظت باقیمانده دارو در نمونه خارج از محدوده منحنی باشد، نمونه را می توان بیشتر برای آزمایش رقیق کرد (به عنوان مثال: 50 لیتر مایع لایه میانی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید ببرید، 950 آب دیونیزه اضافه کنید، ضریب رقت 100 است. ).

 

6. روش های الایزا

6.1 دستورالعمل
1. معرف های الایزا را قبل از استفاده به دمای اتاق (20 تا 25 درجه سانتیگراد) برسانید.
2. واکنشگرهای ELISA را بلافاصله پس از استفاده به دمای 2-8 ℃ برگردانید
3. تکرارپذیری ELISA در فرآیند تجزیه و تحلیل تا حد زیادی به قوام صفحه شستشو بستگی دارد، عملکرد صحیح صفحه شستشو نقطه تعیین برنامه الایزا است.
4. در تمام فرآیندهای جوجه کشی با دمای ثابت، از قرار گرفتن در معرض نور اجتناب کنید، میکروپلیت را با غشای پوششی ببندید.

6.2 رویه های عملیاتی

1. کیت را حداقل به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق (20-25 درجه سانتیگراد) قرار دهید، توجه داشته باشید که هر معرف باید قبل از استفاده به خوبی تکان داده شود.
2. نوارهای میکرووله مورد نظر را در قاب بشقاب قرار دهید.میکروپلیت های استفاده نشده باید دوباره بسته شوند و در دمای 8-2 درجه سانتیگراد نگهداری شوند، نه منجمد.
3. آماده سازی محلول: 40 میلی لیتر از بافر شستشوی 20× غلیظ را بردارید و آن را در آب دیونیزه به نسبت 1:19 حل کنید (1 قسمت بافر شستشوی غلیظ 20 + 19 قسمت آب دیونیزه) یا در صورت نیاز آماده کنید.
4. شماره گذاری: ریز چاه ها را با توجه به نمونه ها و محلول های استاندارد شماره گذاری کنید.هر نمونه و محلول استاندارد باید در دو نسخه انجام شود.موقعیت های خود را ثبت کنند.
5. اضافه کردن استاندارد/نمونه: 50 میکرولیتر نمونه یا محلول استاندارد را برای جداسازی چاهک های دوتایی اضافه کنید، سپس آنزیم مزدوج، 50 میکرولیتر در چاه را اضافه کنید.سپس محلول کار آنتی بادی، 50 میکرولیتر در چاه.به آرامی با تکان دادن صفحه با دست مخلوط کنید، میکروپلیت را با یک فیلم پوششی ببندید و در دمای 25 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه در تاریکی انکوبه کنید.
6. میکروپلیت را بشویید: فیلم پوشش را با دقت باز کنید و مایع را در میکرووله بریزید.250 میکرولیتر در چاه بافر شستشو اضافه کنید، هر بار 4-5 بار به مدت 30-15 ثانیه کاملا بشویید، سپس آن را با کاغذ جاذب بردارید و خشک کنید.(بعد از خشک شدن حباب های هوا را با نیزه استفاده نشده سوراخ کنید)
7. توسعه رنگ: 50 میکرولیتر محلول زیرلایه A را به هر چاهک اضافه کنید و سپس 50 میکرولیتر محلول B را اضافه کنید. با تکان دادن صفحه با دست به آرامی مخلوط کنید و به مدت 15 دقیقه در دمای 25 درجه سانتیگراد در تاریکی برای رنگ آمیزی انکوبه کنید.
8. سنجش: 50 میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید.با تکان دادن بشقاب با دست به آرامی مخلوط کنید.برای تعیین مقدار OD هر چاهک، طول موج میکروپلیت خوان را روی 450 نانومتر تنظیم کنید.(توصیه می شود مقادیر OD را در طول موج های دوگانه 450/630 نانومتر در عرض 5 دقیقه بخوانید).

 

7. قضاوت نتیجه

دو روش برای قضاوت در مورد نتایج وجود دارد.اولی قضاوت تقریبی است، در حالی که دومی تعیین کمی است.توجه داشته باشید که مقدار OD نمونه با زرالنون نمونه همبستگی منفی دارد
7.1 تعیین کیفی
محدوده غلظت (ppb) را می توان با مقایسه میانگین مقدار جذب با استانداردها به دست آورد.فرض کنید مقدار جذب نمونه اول 0.3، نمونه دوم 1.0 و استانداردها عبارتند از: 0ppb از 2.243;0.1ppb از 1.816;0.3ppb از 1.415;0.9ppb از 0.74;2.7ppb از 0.313;8.1ppb از 0.155.سپس غلظت نمونه یک در محدوده 2.7ppb ~ 8.1ppb است.نمونه دوم 0.3ppb ~ 0.9ppb است.محدوده غلظت زرالنون در نمونه ها را می توان با ضرب در رقت متناظر نمونه بدست آورد.
7. 2 تجزیه و تحلیل کمی
برای محاسبه غلظت نمونه ها باید یک منحنی استاندارد ایجاد کرد.قبل از ایجاد منحنی استاندارد، مفهوم درصد جذب باید شناخته شود.
محاسبه درصد جذب:

 

درصد مقدار جذب =	ب	× 100%
	B0

ب - مقدار متوسط ​​OD نمونه یا محلول استاندارد
B0 - مقدار متوسط ​​OD محلول استاندارد 0ng/mL
بنابراین استاندارد صفر برابر با 100% ساخته شده و مقادیر جذب به صورت درصد ذکر شده است.مقادیر محاسبه شده برای استانداردها در یک سیستم مختصات بر روی کاغذ گراف نیمه لگاریتمی در برابر غلظت Zearalenone [ng/mL] وارد می شود.غلظت Zearalenone بر حسب ng/ml مربوط به جذب هر نمونه را می توان از منحنی کالیبراسیون خواند.
یک نرم افزار ویژه برای تجزیه و تحلیل نتایج ELISA تعیین دو یا چندگانه را تسهیل می کند.در صورت نیاز لطفا برای درخواست تماس بگیرید.

8. اقدامات احتیاطی

1. دمای اتاق زیر 25 ℃ یا دمای معرف ها و بازگرداندن نمونه ها به دمای اتاق (20-25 ℃) منجر به کاهش استاندارد OD می شود.
2. خشکی میکروپلیت در فرآیند شستشو با شرایطی از جمله منحنی های استاندارد غیر خطی و تکرارپذیری نامطلوب همراه خواهد بود.بنابراین بلافاصله پس از شستشو به مرحله بعدی ادامه دهید.
3. قبل از افزودن هر معرف به طور یکنواخت مخلوط کنید.
4. محلول توقف محلول اسید سولفوریک 2 مولار است، از تماس با پوست خودداری کنید.
5. از کیت بیش از تاریخ انقضای آن استفاده نکنید.استفاده از معرف های رقیق شده یا تقلبی از کیت ها منجر به تغییر در حساسیت و تشخیص مقادیر OD می شود.معرف ها را از کیت های شماره های مختلف برای استفاده تعویض نکنید.
6. ذخیره سازی: در دمای 2-8 ℃، یخ زده نگهداری کنید.میکروپلیت استفاده نشده را در یک کیسه آب بندی خودکار قرار دهید تا دوباره آب بندی شود.ماده استاندارد و رنگ بی رنگ حساس به نور است و بنابراین نمی توان آنها را مستقیماً در معرض نور قرار داد.
7. محلول رنگی را با هر رنگی که نشان دهنده انحطاط این محلول است دور بریزید.مقدار تشخیص (450/630nm) محلول استاندارد 0 (0 ppb) کمتر از 0.5 ((A450nm<0.5)) نشان دهنده انحطاط آن است.
8. دمای واکنش بهینه 25 ℃ است و دمای خیلی بالا یا خیلی پایین باعث تغییر در حساسیت تشخیص و مقادیر OD می شود.

9. تاریخ نگهداری و انقضا

ذخیره سازی: در دمای 2 تا 8 ℃، یخ زده نگهداری شود.
تاریخ انقضا: 12 ماه;تاریخ تولید روی جعبه درج شده است
توجه: اگر بسته خلاء میکروپلیت نشتی داشته باشد، استفاده از آن همچنان معتبر است، در نتیجه آزمایش تأثیری نداشته باشید، برای استفاده راحت باشید.

 

 

 

 

 

 

 

Q1: چه زمانی ارسال می شود؟
A1: ما کالا را در اسرع وقت ظرف 7 روز کاری پس از دریافت پرداخت برای شما ارسال می کنیم.(در صورت وجود عوامل خارجی مانند اپیدمی، ممکن است زایمان به تاخیر بیفتد)

 

Q2: آیا از OEM/ODM پشتیبانی می کند؟
A2: می توان آن را پشتیبانی کرد، اما مقدار خاص باید بیش از 100000 قطعه باشد، که برای محصولات سفارشی مناسب است.

 

Q3: کارخانه شما از نظر کنترل کیفیت چگونه است؟
A3: ما گواهینامه ملی ISO9001 و ISO13485 را داریم.فرآیند تولید ما مطابق با روش های استاندارد برای اطمینان از کیفیت مطلوب محصول است.

 

Q4: چگونه خدمات پس از فروش را ارائه دهیم؟
A4: ما خدمات پس از فروش فنی آنلاین حرفه ای را ارائه می دهیم.ما می توانیم از طریق ویدئو، تلفن و غیره به شما راهنمایی های تک به تک ارائه دهیم.

 

Q5: روش پرداخت چیست؟
A5: ما پرداخت را توسط T/T دریافت می کنیم.

 

Q6: چگونه حمل کنیم؟
A6: بهترین روش حمل و نقل را با دریافت قیمت از بسیاری از شرکت های حمل و نقل تعاونی ما انتخاب کنید و همچنین مطابق با نیاز خود ارسال کنید.